换一批
换一批抗人CD3单链抗体四聚体基因的构建及表达
Construction and Expression of Tetramerized Single Chain Fv Antibody Gene Specific for Human CD3 Molecule
摘要为构建和表达抗人CD3单链抗体(scFv)/人p53四聚功能域融合基因,选用人IgG3上游铰链区作为抗人CD3 scFv和人p53四聚功能域之间连接的linker.利用递归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四聚功能域融合基因,克隆入pUC18载体中构建pUC18/IgG3/p53克隆载体.将抗人CD3 scFv克隆入pUC18/IgG3/ p53载体中,构建抗人CD3 scFv/人p53四聚功能域融合基因.经酶切鉴定及序列测定证实后,将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2-B中,转染HeLa细胞进行表达,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行亲和活性测定.获得了抗人CD3 scFv/人p53四聚功能域融合基因,基因全长882 bp,可编码294个氨基酸,与已发表的抗人CD3 scFv、人IgG3上游铰链区和人p53四聚功能域基因cDNA序列一致.表达产物经SDS-PAGE和Western印迹实验证实为约35 kD的特异蛋白条带,纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合人外周血单个核细胞(PBMC)细胞,亲和力高于scFv,为进一步临床应用奠定基础.
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分类号
R392.11
栏目名称
研究论文
DOI
10.3969/j.issn.1007-7626.2003.05.010
发布时间
2004-02-06
基金项目
国家自然科学基金
军队重点实验室基金
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