换一批
换一批抗Caspase-3核酶M1RNA的制备与体内外活性鉴定
Preparation and Identification of M1RNA Ribozyme in vitro and in vivo Designed Against Human Caspase-3 mRNA
摘要为评价抗caspase-3核酶在阻抑细胞凋亡发生中的潜在价值,以RNase P催化亚基M1RNA为模板,设计合成3个特异性针对人caspase-3的核酶pM1-GS716、pM1-GS337和pM1-GS235,并对它们的体内外切割活性进行探讨.32P标记的caspase-3基因片段体外转录物作为靶RNA,体外切割实验表明,pM1-GS716和pM1-GS337均有切割活性,其中pM1-GS716的切割效率可达到93%.3个核酶转染HeLa细胞,评价其在体内的切割活性.在TNF-α作用下,转染pM1-GS716的HeLa细胞内caspase-3 mRNA下降了75%,蛋白含量下降了69%,caspase-3蛋白酶活性下降了52%.Hoechst 33258染色表明,细胞凋亡率较对照明显下降(分别为21.6±0.7%和49.4±0.2%,P<0.01).提示体外制备的pM1-GS716具有良好的特异催化切割活性,有望通过切割caspase-3而抑制细胞凋亡.
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