换一批抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体基因的克隆、表达及其生物学活性
Molecular Cloning, Expression and Biological Activity of a Functional ScFv to the Alpha-toxin of Clostridium perfringens Type A
摘要应用RT-PCR技术,从分泌具有中和活性的抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株1A8中,分别扩增出抗体VH和VL基因,用linker (Gly4Ser)3基因,将VH和VL基因连接成单链抗体(ScFv)基因,并将其克隆至pGEM-T载体中.经核苷酸序列分析证实,VH和VL基因及linker基因拼接正确,ScFv-1A8基因全长为726 bp,编码242个氨基酸,VH和VL基因符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征,分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ(A)和轻链κⅣ家簇.将ScFv-1A8基因克隆至表达载体pHOG21中,构建了重组质粒pHOG-1A8,然后转化至受体菌XL1-BLUE中,得到重组菌株XL1-BLUE (pHOG-1A8).ELISA检测和SDS-PAGE分析表明:经IPTG诱导后所表达的目的蛋白存在于重组菌株XL1-BLUE (pHOG-1A8)的胞周质中.经薄层扫描分析:重组菌株XL1-BLUE(pHOG-1A8)的蛋白表达产物占菌体可溶性蛋白的12%,其相对分子量约为31 kD.ScFv的生物学活性研究表明,ScFv蛋白不但具有中和磷脂酶C的活性,而且还能够对致死性腹腔攻击的小鼠产生良好的被动保护作用.
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关键词
A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体小分子基因克隆和表达生物学活性Clostridium perfrigens type Aalpha-toxinScFvgene cloning and expressionbiological activity
医学主题词
基因(Genes)产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)单链抗体(Single-Chain Antibodies)生物学(Biology)蛋白(Egg White)
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-7626.2003.06.002
发布时间
2004-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
军队医药项目（98Q076）
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