换一批人睾丸前列腺素D合成酶在毕赤氏酵母中的表达、纯化及鉴定
Secretory Exprossion of Human Testis Prostaglandin D Synthase in Pichia pastoris
摘要L-PGDS是一种双功能蛋白,即催化PGD2产生和运输亲脂/疏水分子.L-PGDS主要分布于脑和男性生殖器官,并分泌到脑脊液、血清、精液、尿液等体液中.测定体液中L-PGDS的含量可辅助诊断一些神经系统疾病、生殖系统疾病、心血管疾病和肾脏疾病等.在毕赤氏酵母中表达人睾丸前列腺素D合成酶,以利于进一步的生物学功能及临床应用研究.用PCR的方法从质粒pGEX-2T/htL-PGDS上扩增出人睾丸L-PGDS成熟肽基因编码序列,经测序证实后,将其插入到质粒pPIC9中,构建该基因的酵母表达质粒.电转化毕赤氏酵母GS115,经甲醇诱导后,可实现L-PGDS的高效、分泌性表达.镍离子亲合层析法对表达上清进行纯化,SDS-PAGE分析证实,在27 kD处有重组蛋白的表达,表达量为27 mg/L.纯化蛋白可与视黄酸结合,使其紫外吸收波谱发生红移.
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DOI
10.3969/j.issn.1007-7626.2003.06.012
发布时间
2004-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
解放军计划生育基金（(军计生98-04号)）
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