食蟹猴疟原虫(Plasmodium cynomolgi)中一个真核翻译起始因子4A(eIF-4A)同源蛋白的cDNA克隆、表达和ATP酶活性测定

cDNA Cloning,Expression and ATPase Assay of a Putative eIF-4A of Plasmodium cynomolgi

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摘要真核翻译起始因子4A(eukaryotic initiation factor 4A,eIF-4A)是DEAD盒蛋白家族的ATP依赖性的RNA解旋酶类中的一个原型成员.它在真核细胞的蛋白质合成的起始过程中起着关键性作用.通过PCR扩增和放射探针杂交相结合的方法筛选食蟹猴疟原虫(Plasmodium cynomolgi)的cDNA文库,克隆了一个eIF-4A同源蛋白的完整cDNA序列,命名为CH1 F.CHl F全长1753 bp,包含一个1197 bp的完整阅读框,推测编码一个由398个氨基酸组成的蛋白.对CH1F的蛋白序列用BlastP进行搜索和分析,提示它应该是DEAD盒家族的一个eIF-4A同源蛋白;用DNAStar将其与许多典型的DEAD盒蛋白序列进行比对分析,结果显示:比起其它的DEAD盒蛋白,它与eIF-4A或eIF-4A的同源蛋白具有更高的同源性和更多序列上的相似结构域.将包含完整阅读框的片段亚克隆进表达载体pET-28a(+),在大肠杆菌DH5α中表达,产生的融合蛋白大小在45 kD左右.对该融合蛋白进行纯化、重新折叠和初步鉴定.ATP酶活性检测显示,该融合蛋白只有很低的ATP酶活性,而且它的ATP酶活性似乎不依赖于核酸底物.对这一检测结果给出3种可能的原因.这一检测结果与根据序列分析得到的推论--CH1F蛋白可能是一个eIF-4A并不矛盾.

作者宋平 ^[1] 张竞男 ^[2] 胡珈瑞 ^[3] 李奎 ^[4] 学术成果认领

作者单位华中农业大学动物科技学院,武汉,430070;武汉大学生命科学学院,教育部发育生物学重点实验室,武汉,430072 ^[1] 武汉大学生命科学学院,教育部发育生物学重点实验室,武汉,430072 ^[2] 武汉大学中南医院,武汉,430071 ^[3] 华中农业大学动物科技学院,武汉,430070 ^[4]

关键词真核翻译起始因子4A(eukaryotic initiation factor 4A,eIF-4A),RNA解旋酶,ATP酶,食蟹猴疟原虫(Plasmodium cynomolgi)eIF-4A RNA helicase ATPase Plasmodium cynomolgi

主题词蛋白(Egg White)成束猴(Macaca fascicularis)翻译(Translating)肽起始因子类(Peptide Initiation Factors)性(Sex)

分类号 Q55 Q78

栏目名称 研究论文

DOI 10.3969/j.issn.1007-7626.2004.03.003

发布时间 2004-08-18

基金项目

国家自然科学基金