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人骨唾液蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

Cloning and Expression of Human Bone Sialoprotein in Pichia pastoris GS115

摘要利用RT-PCR技术,从人骨膜组织总RNA中扩增长度为1kb的人骨唾液蛋白(bonesaloprotein,BSP)基因编码区序列,克隆至pBluescriptⅡ,进行双链核苷酸序列测定.构建人BSP毕赤酵母表达质粒pPICZaA-hBSP并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115.SDS-PAGE和Western印迹检测rhBSP的分泌表达.采用镍离子亲合层析纯化rhBSP并检测生物学活性.结果表明,克隆片段与基因库所登录的序列相一致,分泌表达的rhBSP-His融合蛋白分子量约为67 kD,占培养上清总蛋白的80%,浓度约为0.248g/L,rhBSP蛋白具有抑制羟基磷灰石晶体生长的活性.

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中国生物化学与分子生物学报

中国生物化学与分子生物学报

2004年20卷3期

325-329页

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