换一批人核受体Nurrl基因的克隆和表达及产物纯化
Molecular Cloning, Expression and Purification of Human Nuclear Receptor Nurr1
摘要核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1,Nurr1)是主要表达于中脑黑质及腹侧被盖区多巴胺能神经元的一种转录因子,属于核受体超家族成员,其功能性配体尚未被确认.研究表明,Nurr1对中脑多巴胺神经元的发育、存活以及成熟后功能的维持具有特殊重要意义.如能找到它的特异性配体,将为最终筛选出治疗帕金森病等中枢多巴胺失调性疾病的药物或化学合成先导物打下基础.为了获取Nurr1蛋白以标定其配体以及研究蛋白质间的相互作用,采用RT-PCR技术,从人胚中脑组织特异性扩增及克隆了人Nurr1 Cdna,并获得一个在氨基端缺失350 bp碱基的Nurr1突变体.将正常的Nurr1基因片段亚克隆至表达载体pET28a,分别在TNTRT7偶联网织红细胞溶胞系统和大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,均以可溶性形式存在,且产自于体外转录/翻译系统的真核表达Nurr1蛋白已标记上同位素35S.Western印迹分析表明，所表达的重组目的蛋白具有特异的免疫反应性.经Ni-NTA亲和层析，得到了初步纯化的rhNurr1蛋白.
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关键词
核受体相关因子1基因克隆体外转录/翻译原核表达亲和层析产物纯化Nurr1 (nuclear receptor-related factor 1 )gene cloningprokaryotic expressionaffinity chromatographyin vitro transcription/translationpruduct purification
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-7626.2004.05.003
发布时间
2004-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30070245）
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