换一批
换一批摘要泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132处理的HeLa和SaoS-2细胞中,低表达的p21WAF/CIP1受泛素-蛋白酶体通路调控.为探讨肿瘤细胞中高表达的E3连接酶底物结合亚基-Skp和低表达的P21WAF/CIP1之间的关系,在HeLa细胞中转染Skp2的反义寡核苷酸后,p21表达水平明显升高.同时,相对于转染空载体和Skp2△F(Skp2的F-box缺失突变体)的真核表达载体,转染全长Skp2的HeLa细胞中,p21表达水平显著下降,说明肿瘤细胞中Skp2调节p21的稳定性,并且这种调控作用依赖于Skp2蛋白中的F-box结构.免疫荧光结果表明,Skp2和p21共定位于细胞核,这为两者间的相互作用提供了前提;体内相互免疫共沉淀结果表明,p21和其它SCskp2的底物一样与Skp2直接结合,并且它们之间的结合区不在F-box结构域,这一结果在体外的GST-pull doWn实验中得到验证.
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