换一批F43Y及I354M,L358F定点突变对植酸酶热稳定性及酶活性的改善
Site-directed Mutagenesis Improves the Thermostability and Specific-activity of Phytase Mutated by F43Y and I354M, L358F
摘要对重组酵母PP-NPm-8的植酸酶phyAm基因进行PCR介导的定点突变,即将植酸酶43位的苯丙氨酸替换为酪氨酸(F43Y),将其354、358位的异亮氨酸、亮氨酸分别替换为甲硫氨酸和苯丙氨酸(I354M,L358F),得到了2个突变体PP-NPm-1(F43Y)及PP-NPm-2(I354M,L358F).含突变基因的重组表达载体pPIC 9k-phyAm-1,pPIC 9k-phyAm-2在毕赤酵母GS115中表达,对表达产物进行酶活性测定及热稳定性检测.结果表明:突变体PP-NPm-1最适反应温度比未突变体PP-NPm-8上升了3℃,75℃处理10 min,热稳定性提高15%,比活力提高11%;PP-NPm-2最适反应温度未改变,热稳定性比PP-NPm-8仅提高3%,比活力降低6.5%.对突变前后的植酸酶空间结构进行比较预测,发现突变氨基酸Tyr43与空间位置相邻的Asn416之间形成氢键,增强了酶的热稳定性.
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分类号
Q756（分子遗传学）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1007-7626.2005.04.015
发布时间
2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家科技攻关计划（2002BA514A-12）
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