换一批
换一批凋亡抑制因子Survivin在大肠杆菌TB1中的表达纯化及鉴定
Expression and Purification of Human Survivin Protein-Apoptosis Inhibitor in E.coli TB1
摘要本文旨在克隆凋亡抑制因子Survivin基因,并在大肠杆菌中进行可溶性表达与初步纯化.采用RT-PCR法,扩增人凋亡抑制因子survivin cDNA,并克隆入原核表达载体pMAL-p2X中,转化TB1大肠杆菌感受态细胞.经0.3 mmol/L IPTG诱导2 h后,收集菌体蛋白,进行SDS-PAGE、ELISA及Western印迹鉴定.实验获得凋亡抑制因子survivin编码区cDNA,以构建的原核表达载体pMALp2X-survivin转化菌株后,可表达凋亡抑制因子survivin和麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白,相对分子质量(Mr)为58 000.并成功利用Factor Xa将融合蛋白裂解开.ELISA和Western印迹表明,融合蛋白能与抗凋亡抑制因子survivin单克隆抗体特异性结合.获得的凋亡抑制因子survivin全长cDNA可在大肠杆菌TB1中以MBP-survivin融合蛋白的形式表达,成功地将survivin目的蛋白和MBP蛋白分离,为深入研究survivin的结构和功能奠定了基础.
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