换一批嗜热菌HB8 Fe-S簇生物合成相关酶SufS与SufE 重组酶的体外复合体功能
Function of the in vitro Recombinant SufS-SurE Complex in the Fe-S Cluster Biosynthesis Pathway from the Thermus thermophilus HB8
摘要Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用,参与电子传递和基因调节等过程.以嗜热菌HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe-S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因.将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上,构建重组质粒sufS-pET28a和sufE-pGEX-6P-1.重组质粒转化E.coli BL21(DE3)菌株进行蛋白质表达及亲和层析纯化.研究证明,SufS具有脱硫酶活性,而SufE的存在可增强其活性.体外重组实验表明,在60℃孵育SufS和SufE1.0～2.5 h,其复合体脱硫酶活性约是单体SufS的2倍,但两者相互作用时间短暂.若通过交联剂Mts-Atf-Biotin使SufS与SufE共价连接,此时SufSE酶活性是SufS的6倍左右,并可持续72 h.
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关键词
嗜热菌HB8Fe-S簇交联剂重组Thermus thermophilus HB8 iron-sulfur clusters cross-linking agent reconstitution
分类号
Q55（酶）
栏目名称
发布时间
2014-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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