换一批耐高温重组CotA蛋白的胆红素氧化酶反应动力学及活性鉴定
Characterization of the Enzymatic Kinetics and Function of Thermostable Recombinant CotA as Bilirubin Oxidase
摘要已知源于枯草芽孢杆菌内生孢子的CotA蛋白具有漆酶和胆红素氧化酶活性.然而,其分离纯化极为困难.本研究对表达与纯化的重组CotA蛋白的胆红素氧化酶特性及氧化还原功能进行鉴定.基因转染及筛选获得了表达CotA的P.pastoris菌株;继而,表达的重组CotA蛋白经DEAE-Sepharose FF及Sephadex G-75层析分离与纯化,产物得率为25％,纯化产物的酶比活性为4 U/mg.经SDS-PAGE和MALDI-TOF MS分析显示,其分子质量为65 kD.纯化的CotA蛋白能够催化胆红素氧化,生成胆绿素,且催化反应速率受反应溶液中溶解氧含量的影响,提示纯化的重组CotA具有胆红素氧化酶活性.酶反应进一步证明,CotA的胆红素氧化酶反应最适pH值为pH 8.0,最适温度为60℃.该酶在90℃条件下的半衰期为7h,提示CotA胆红素氧化酶具有高度的热稳定性.CotA修饰的摄谱仪石墨电极可直接电催化分子氧(O2)还原,具有很好的电流响应.我们的结果表明,重组的CotA蛋白具有耐高温胆红素氧化酶活性.更重要的是,我们的结果还提示重组的CotA蛋白在酶生物燃料电池阴极的制备上具有较好的应用潜能.
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关键词
内生孢子的CotA蛋白胆红素氧化酶生物催化酶生物燃料电池endospore coat CotA proteinbilirubin oxidasebiocatalystenzymatic biofuel cells
分类号
Q554（酶）
栏目名称
DOI
10.13865/j.cnki.cjbmb.2016.07.11
发布时间
2016-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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