换一批启动子荧光素酶报告系统检测低浓度过氧化氢激活神经肽PACAP特异受体PAC1-R启动子的作用
Analyzing Activation of the Promoter of Neuropeptide PACAP Preferring Receptor PAC1-R under Low Concentration Hydrogen Peroxide Exposure using Promoter Luciferase Reporter System
摘要垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)特异受体PAC1-R(PACAP receptor 1)是神经系统疾病药物开发的重要靶点.为了研究其表达的生物学机制,本研究克隆了PAC1-R基因转录起始位点上游从-2 500到+26的2 526 bp启动子片段,构建PAC1-R启动子驱动的荧光素酶基因报告载体pGL3-PAC1-Rp,并确证PAC1-R启动子荧光素酶报告系统在小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a和人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中工作正常.运用此PAC1-R启动子荧光素酶报告系统,首次发现低浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)有效激活PAC1-R启动子,此作用可被转录因子特化蛋白1(specificity protein 1,SP1)抑制剂光神霉素A(mithramycin A)所抑制,提示SP1参与介导H2O2对PAC1-R启动子的激活作用.生物信息学分析显示,PAC1-R启动子含有多个SP1结合位点.PAC1-R启动子的荧光素酶报告系统的构建为深入探索PAC1-R高表达的作用与机制奠定了基础,低浓度H2O2对PAC1-R启动子激活作用的发现有助于深入诠释低浓度活性氧的生理学作用.
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关键词
PACAP受体1启动子荧光素酶报告系统过氧化氢(H2O2)特化蛋白1(SP1)PAC1-Rpromoterluciferase reporter systemhydrogen peroxide (H2O2)specificity protein (SP1)
分类号
Q71（生物大分子的结构和功能）
栏目名称
DOI
10.13865/j.cnki.cjbmb.2016.09.09
发布时间
2016-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金项目（(No.31100545)）
广东省自然科学基金项目（(No.2016A030313087)）
Supported by National Natural Science Foundation of China （(No.30471975)）
Natural Science Foundation of Guangdong Province （(No.2016A030313087)）
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