换一批摘要靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析.该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究.为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍体细胞CCC-HEL-1建立了一种单染色体靶向富集方法.具体步骤如下:(1)首先将人正常核型二倍体细胞同步化到G2/M期,制备染色体悬液;然后流式分选出21号单染色体.(2)采用多重退火环形扩增技术(MALBAC)对21号染色体DNA进行扩增;用扩增的DNA产物构建文库.(3)利用体外转录合成、生物素标记的RNA探针与文库进行液相杂交,捕获并验证捕获效率.荧光定量PCR检测结果证明,特定的21号染色体呈上百倍的富集,而靶标文库则富集了近60倍.结果提示,特异单染色体靶向富集方法成功建立.该法不仅可实现任一单染色体的靶向富集,用于单条染色体功能组学研究,而且还可能用于查找特定疾病相关的染色体异常(如DNA突变、异位、重复及倒置等),具有一定的实用意义.
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关键词
多重退火环形扩增高通量测序靶向富集单染色体流式分选multiple annealing and looping-based amplification cycles (MALBAC)high throughput sequencingtarget enrichment, single chromosomeflow cytometry sorting
栏目名称
DOI
10.13865/j.cnki.cjbmb.2016.09.15
发布时间
2016-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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