换一批利用结构优化的TALE-TF高效诱导MEF细胞内源基因Oct4的表达
An Efficient Method to Induce Endogenous Oct4 Expression in MEF Cells by Optimized Design of TALE-TF
摘要转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)已用于基因组编辑,而TALE转录激活因子(TALE-TFs)可用于内源基因的调控.通过修饰的TALE蛋白与内源基因的启动子特异性结合来激活或抑制基因的表达.但是,对于截短了N端的TALE是否会影响TALENs的效率还不确定.本文设计了不同长度N端的TALENs哺乳动物及酵母表达载体,对应哺乳动物绿色荧光报告载体及酵母报告载体.分别在哺乳动物细胞和酵母细胞上对不同长度N端TALENs的活性进行了检测.检测结果发现,含120个氨基酸N端的TALEN在酵母AH109细胞中的活性最高,N端长度为153个氨基酸的TALENs在293T细胞中表现最高的活性,但N端长度为153、140和160个氨基酸的TALENs的活性差异不显著(P＞0.05).随后,将结构优化了的TALE-TF用于小鼠胎儿成纤维细胞中激活Oct4基因.相对阴性对照组,TALE-TF将Oct4基因表达量上调了418倍.本研究结果表明,在哺乳动物细胞和酵母细胞中,具有最高活性TALENs的N端长度是不同的.本研究用结构优化的TALE-TF诱导内源基因高水平的表达,为从体细胞中获得iPS细胞提供了研究策略.
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关键词
TALE-N端转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)Oct4基因TALE转录激活因子(TALE-TF)TALE N-terminalTALE-based nucleases (TALENs)Oct4 geneTALE transcript factors (TALE-TF)
栏目名称
DOI
10.13865/j.cnki.cjbmb.2017.05.07
发布时间
2017-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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