CircECH1通过充当miR-365-5p海绵抑制猪前体脂肪细胞增殖

CircECH1 Inhibits Proliferation of Porcine Preadipocyte by Sponging MiR-365-5p

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摘要环状RNA(circRNA)是一种共价封闭RNA,在脂肪发育过程中具有重要作用.本研究旨在探讨猪环状RNA ECH1(circECH1)对前体脂肪细胞增殖的调控机制.本研究通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析、Sanger测序和RNase R酶消化法成功鉴定circECH1的稳定环状结构,其在马身猪各个组织中均有表达,并且其在脂肪组织中的表达量随日龄增加呈上升趋势.功能研究证明,干扰circECH1后,增殖相关基因PCNA、CDK1和MKi67极显著升高(P＜0.01),增殖细胞数量极显著增加(P＜0.01).为进一步探究其分子机制,使用miRDB、miRWalk和RNAhybrid预测circECH1的下游靶基因.通过双荧光素酶报告基因分析和RNA结合蛋白免疫沉淀技术,验证cir-cECH1 能靶向结合miR-365-5p.在猪前体脂肪细胞中过表达miR-365-5p会增殖相关基因PCNA和CDK1的表达量极显著升高(P＜0.01),增殖细胞数量极显著增加(P＜0.01);干扰miR-365-5p后增殖相关基因PCNA、CDK1和MKi67的表达量极显著降低(P＜0.01),增殖细胞数量极显著增加(P＜0.01).挽救实验结果显示,共转染si-circECH1和miR-365-5p inhibitor与单独转染miR-365-5p inhibitor相比,增殖相关基因PCNA、CDK1和MKi67的表达量显著升高(P＜0.01),增殖细胞数量显著升高.本研究结果证明,circECH1存在于马身猪的脂肪组织中,并且通过海绵吸附miR-365-5p调控猪前体脂肪细胞增殖,为进一步了解调控猪前体脂肪细胞的分子机制提供理论依据.