换一批基于相互作用蛋白质的质谱鉴定揭示高尔基体蛋白73对RNA剪接效率的调控作用
Mass Spectrometry-based Identification of GP73 Interacting Proteins Reveals Its Regulatory Role on RNA Splicing Efficiency
摘要蛋白质-蛋白质相互作用在细胞的生化功能中扮演极为重要的角色,深入解析蛋白质相互作用关系是理解细胞生命活动的关键.本研究以高尔基体蛋白73(golgi protein 73,GP73)为研究对象,利用经典的免疫共沉淀联合质谱技术系统挖掘了 GP73的相互作用蛋白质,力求进一步解析GP73的分子功能.选取肝癌细胞系HepG2,利用慢病毒感染技术构建过表达GP73-3Flag的稳定细胞系,免疫共沉淀联合质谱检测鉴定出78个高置信的GP73相互作用蛋白质,生物信息学分析提示,GP73与近40个细胞核蛋白质存在相互作用,并参与RNA运输、剪接和翻译等生物学过程,进一步的免疫荧光和细胞核蛋白质分离实验证实,GP73在多种肿瘤细胞中的细胞核定位,在78个相互作用蛋白质的基础上进一步筛选出与mRNA剪接相关的蛋白质相互作用网络,并通过免疫共沉淀验证了 GP73与HNRNPH3、SMN1、RBM14、NCBP1等7种蛋白质存在相互作用.Minigene剪接实验提示,过表达GP73抑制细胞对pre-mRNA的剪接效率.本研究拓展了对GP73蛋白功能的认识和理解,有助于解释其在细胞生物学中的重要角色及其与疾病的潜在关联.
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关键词
蛋白质-蛋白质相互作用高尔基体蛋白73免疫共沉淀联合质谱检测生物信息学分析细胞核定位剪接效率protein-protein interactionsGolgi protein 73(GP73)co-immunoprecipitation mass spec-trumbioinformatics analysisnuclear localizationsplicing efficiency
分类号
Q291（细胞分子生物学）
栏目名称
DOI
10.13865/j.cnki.cjbmb.2025.02.1432
发布时间
2025-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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