换一批摘要大豆是一种重要的植物蛋白质来源,在幼儿和幼小动物具有较高的过敏性,尤其是其中的β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin),约占大豆总蛋白质的30％,是主要的过敏原.传统的ELISA检测方法依赖于多克隆抗体或单克隆抗体,这些抗体分子量大,难以接触核心区域,且对酸碱敏感,限制了快速检测的应用.纳米抗体(nanobodies,Nbs)源自驼科动物的重链抗体可变区,具有体积小、结构稳定、特异性强和亲和力高等优点.本研究旨在研制β-伴大豆球蛋白的纳米抗体,使用β-伴大豆球蛋白对羊驼进行5次免疫,ELISA检测显示,其重链抗体效价为1∶16 000;随后分离外周血淋巴细胞并提取总RNA,通过PCR扩增重链抗体的可变区,构建重组质粒并转化至ER2738感受态,获取Nbs噬菌体展示文库.该文库的库容约为3.5×108 CFU/mL,经辅助噬菌体拯救后达到1.15× 1012 PFU/mL,Nbs基因插入率为100％.通过4轮固相筛选,其纳米抗体噬菌体输出明显富集,富集率为155.9;Phage-ELISA结果显示,筛选出35株阳性克隆,测序结果显示,均为同一氨基酸序列.将该Nbs进行原核表达,通过Western印迹和ELISA验证其对β-伴大豆球蛋白具有良好的结合能力.这一研究为开发Nbs的β-伴大豆球蛋白快速检测方法奠定基础.
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