摘要Colgalt1异常表达与肿瘤发生、发展密切相关,但其调控巨噬细胞影响肿瘤发展的机制尚不明确.本研究旨在构建巨噬细胞特异性Colgalt1基因敲除小鼠模型,以深入探究Colgalt1调控巨噬细胞功能进而影响肿瘤相关疾病发生和发展的机制.首先,利用基因编辑构建了 Colgaltlnox+小鼠,随后将其与髓细胞系(包括单核细胞、成熟巨噬细胞)组织特异性表达的Lyz2-Cre+小鼠进行杂交.通过这一策略,成功获得基因型为Colgalt1-/-Lyz2-Cre+的小鼠,实现了巨噬细胞中Colgalt1基因的条件性敲除,以Colgalt1flox/flox Lyz2-Cre-小鼠作为对照组.通过PCR和琼脂糖凝胶电泳技术对敲除小鼠的Flox及Cre基因型进行鉴定.采用实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹技术,检测敲除小鼠骨髓来源巨噬细胞中Colgalt1的表达水平.Western印迹结果显示,与对照组相比,敲除小鼠骨髓来源的巨噬细胞中Colgalt1的表达水平显著下调(P＜0.01);RT-qPCR结果显示,与对照组相比,敲除小鼠骨髓来源的巨噬细胞中Colgalt1在mRNA水平显著下调(P＜0.001),而在小鼠的肝、肺和脾等组织中,Colgalt1基因的mRNA表达无明显差异.此外,采用免疫组织化学方法检测肝内特异性巨噬细胞中Colgalt1的表达,结果显示,在敲除小鼠肝的巨噬细胞中未观察到Colgalt1阳性表达.通过苏木精-伊红染色观察2组小鼠肝组织内细胞形态,结果显示,2组小鼠肝组织内细胞形态无明显差异,且组织器官未发现明显病变,小鼠整体生存亦未受到影响,最后,通过RT-qPCR检测了巨噬细胞相关炎性因子在2组小鼠BMDMs中的表达,结果表明,与对照组相比,敲除组小鼠BMDMs中TNF-α表达显著下调(P＜0.05),而IL-10(P＜0.01)、精氨酸酶1(arginase 1)(P＜0.001)和CD206(P＜0.001)表达显著上调,表明巨噬细胞敲除Colgalt1后呈现抗炎趋势并向M2极化.综上所述,本研究成功构建了巨噬细胞特异性Colgalt1基因敲除小鼠,为深入探究Colgalt1在巨噬细胞功能调控以及肿瘤疾病发生机制中的具体作用,提供了更为可靠的实验动物模型,有望为肿瘤等疾病的治疗提供新的靶点和思路.