摘要脂肪和肥胖相关基因(fat mass and obesity associated gene,FTO)作为一种重要的RNA N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)去甲基化酶,被报道可通过调节m6A修饰水平影响谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathion peroxidase 4,GPX4)的表达.GPX4是抑制铁死亡(ferroptosis)的关键分子,而铁死亡信号的激活已被证实可显著减少小鼠原代脂肪细胞和高脂饮食喂养小鼠的脂质累积.然而,Gpx4 mRNA中具体的m6A修饰位点尚未明确,且Gpx4在小鼠脂肪细胞分化过程中的调控作用亦不清楚.为此,本研究旨在明确小鼠Gpx4mRNA中的m6A修饰位点,并深入探讨Gpx4对3T3-L1脂肪细胞分化的调控作用.通过生物信息学分析结合MeRIP-qPCR和SELECT实验验证,本研究确定Gpx4 mRNA的一个关键m6A修饰位点位于距其转录起始位点303 bp处.利用CRISPR-Cas9技术在3T3-L1细胞中敲低GPX4并进行成脂诱导分化,油红O结果显示,GPX4敲低显著减少了胞内脂滴累积(P＜0.001);RT-PCR和Western印迹分析进一步表明,关键成脂分化基因(C/ebpα、Pparγ、Lpl、Fabp4)表达情况显著下降(P＜0.001).为探究Gpx4调控作用的时间特异性,在成脂分化不同阶段给予GPX4抑制剂RSL3(100 nmol/L).结果显示,在有丝分裂扩增期给予RSL3处理,能显著抑制成脂相关基因(Fabp4、Pparγ和Adipoq)表达并阻碍脂肪分化进程.综上所述,本研究不仅明确了小鼠Gpx4 mRNA中一个关键的m6A修饰位点(位于转录起始位点303 bp),更重要的是揭示了 Gpx4在3T3-L1脂肪细胞分化中扮演的关键调控角色.这些发现不仅将FTO-m6A-GPX4-铁死亡调控轴与脂肪细胞分化联系起来,也为深入理解肥胖的病理机制提供了新的理论依据和潜在干预靶点.