知母糖基转移酶基因AaUGT2克隆、表达及特性研究
Cloning,Expression,and Characterization of the Glycosyltransferase Gene AaUGT2 from Anemarrhena asphodeloides
摘要知母(Anemarrhena asphodeloides Bunge)是我国著名的传统中药材之一,其广泛的药用功效与其体内的活性成分密切相关.类黄酮糖苷作为知母的重要活性成分之一,具有多种药理活性,近年来受到研究者们的重视.作为催化类黄酮糖苷生成的下游关键修饰酶,糖基转移酶在类黄酮糖苷的生物合成途径中发挥着至关重要的作用.然而,知母中类黄酮糖基转移酶的相关报道较少.本研究基于知母转录物组数据挖掘并克隆出 1 条糖基转移酶基因 AaUGT2.序列分析表明,AaUGT2 的开放阅读框长度为 1 347 bp,编码 448 个氨基酸.实时荧光定量PCR显示,AaUGT2 在知母的须根、根茎和叶部位均有表达,其中,AaUGT2 在根茎中表达量最高.原核表达表明,AaUGT2 成功表达出可溶性蛋白质,重组蛋白质大小理论值为70.88 kD.体外酶促反应检测显示,AaUGT2 具有类黄酮7-O-糖基化活性.本研究成功从知母中挖掘并克隆出AaUGT2 基因,并通过功能验证证实AaUGT2 属于类黄酮7-O-糖基转移酶,为进一步解析知母类黄酮糖苷生物合成途径奠定基础.
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