换一批活性可控的血小板衍生生长因子D蛋白工程改造及功能验证
Protein Engineering and Functional Validation of an Activity-Controllable Platelet-Derived Growth Factor D(PDGF-D)Protein
摘要PDGF-D属于血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factors,PDGFs)家族成员,是结缔组织细胞的主要有丝分裂原,特异性结合并激活血小板衍生生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor β,PDGFRβ),在原肠胚形成、器官发育、早期血管形成过程中发挥重要作用.全长PDGF-D因其前结构域(prodomain)的抑制作用,以无活性潜伏态形式分泌.本研究为实现在体外可控激活PDGF-D,将Prodomain与生长因子结构域间的天然酶切位点替换为人鼻病毒3 C蛋白质酶(HRV 3C)特异性识别序列(LEVLFQ ↓ GP).该突变体在HEK-293T细胞中表达并分泌,经亲和层析纯化,可被3C蛋白质酶有效切割.切割所释放的生长因子结构域能特异性激活PDGFRβ受体的酪氨酸磷酸化活性.综上,本研究通过设计改造PDGF-D蛋白酶切割位点,在真核系统中实现了潜伏态蛋白质的体外表达与可控激活,为深入探究PDGF-D与其受体相互作用的分子机制提供了关键技术支撑.
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