石斛内生菌产石斛碱类生物碱发酵培养条件优化及降血糖活性研究
Optimization of Fermentation Culture Conditions and Hypoglycemic Activity of Endophytic Actinomycetes Producing Dendrobium Alkaloids
摘要目的:优化石斛内生菌(Pseudomonas protegens)CM-YJ 44的培养条件,提高其次级代谢产物石斛碱类生物碱的产量.方法:利用单因素试验及正交试验对其发酵培养条件进行了优化,借助高效液相色谱确定了石斛碱类生物碱产量最高的最佳培养条件.利用胰岛素抵抗(IR)细胞模型,二甲双胍(Met)作为阳性对照,测定2-(N-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑-4-氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(2-NBDG)的摄取量,比较菌株次级代谢产物的降血糖活性.结果:优化实验发现,菌株CM-YJ 44培养的最佳碳源、氮源、无机盐添加量、维生素和初始pH值分别为5 g/L果糖、3 g/L酵母浸粉、5 g/L麦芽浸粉、0.1%无机盐.在200 r/min、28℃下培养48 h石斛碱类生物碱产量最高可达到39.56 mg/mL.结果:50 ng/mL和100 ng/mL的石斛碱与CM-YJ 44次级代谢产物作用下,细胞活力分别为101%和91.62%,且均能显著提高细胞2-NBDG的摄取(P<0.05).结论:在最佳培养条件下石斛碱类生物碱产量最高;菌株次级代谢产物降血糖活性优于石斛碱纯品,且二者活性均优于Met.
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