换一批
换一批结核杆菌Ag85A蛋白与日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶的融合表达与纯化
Fusion Expression of Mycobacterium tuberculosis Ag85A and Schistosoma japonicum Gutathione S-transferase and Purification of Expressed Product
摘要目的对结核杆菌Ag85A抗原基因进行克隆、表达与纯化,为研制新型结核杆菌血清学诊断试剂奠定基础.方法以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,经PCR扩增Ag85A抗原基因成熟肽编码区,定向克隆入原核表达载体pGEX1-λT中日本血吸虫谷胱苷肽硫转移酶(GST)编码区下游构建重组质粒,经DNA测序鉴定后,转化大肠杆菌JM109株,IPTG诱导表达,采用GST蛋白纯化试剂盒进行重组融合蛋白纯化,SDS-PAGE和Westernblot鉴定重组表达产物.结果PCR扩增获得了约900 bp的目的基因片断,定向克隆入原核表达载体pGEX1-λT后,对重组质粒进行DNA测序发现,插入片段与GenBank中结核杆菌Ag85A抗原基因成熟肽编码区同源性为99.8%.重组质粒转化大肠杆菌后,经IPTG诱导表达,纯化的融合蛋白相对分子质量为58 000,Western blot检测该融合蛋白能与兔抗结核杆菌多价抗血清发生反应.结论本研究为研制结核杆菌血清学检测试剂盒及相关分子免疫学研究奠定了基础.
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栏目名称
基础研究
DOI
10.3969/j.issn.1004-5503.2005.02.006
发布时间
2005-05-12
基金项目
四川省教育厅资助项目
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