重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A在毕赤酵母中的表达及纯化

Expression of Recombinant Thermomonospora fusca Cellulase Cel6A in Pichia pastoris and Purification of Expressed Product

二维码有效期 120s

摘要目的在毕赤酵母中表达Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.方法提取Thermomonospora fusca基因组DNA作模板,PCR扩增纤维素酶Cel6A基因,克隆到毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,用电击法将线性Cel6A-pGAPZαA核酸片段转化毕赤酵母X-33株,克隆PCR鉴定法筛选阳性转化株,培养传代.选择稳定株,培养3 d后取培养液上清,用His-Bind Quick Cartridge 300提取表达的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.结果一步His-Bind Quick Cartridge 300层析可提取电泳纯的重组Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A,SDS-PAGE分析显示相对分子质量约为60 000,收率为200mg/L,用羧甲基纤维素法测活性为500 U/mg,用滤纸法测活性为1 U/mg.结论已在毕赤酵母中成功表达了Thermomonospora fusca纤维素酶Cel6A.

作者母敬郁 ^[1] 王曦 ^[2] 王峤 ^[3] 陈阳 ^[4] 王恩思 ^[1] 学术成果认领

作者单位吉林大学药学院,长春,130021 ^[1] 吉林大学生命科学学院,长春,130023 ^[2] Department of Medicine,McMaster University,Hamilton L8S3Z5,Canada ^[3] 吉林大学中日联谊医院二部,长春,130021 ^[4]

关键词毕赤酵母 Thermomonospora fusca 纤维素酶Cel6A 层析

主题词纤维素酶(Cellulase)毕赤酵母(Pichia)目的(Goals)方法(Methods)基因组(Genome)

分类号 Q5

栏目名称 基础研究

DOI 10.3969/j.issn.1004-5503.2006.06.008

发布时间 2006-12-18