换一批
换一批百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化
Expression of Bordetella pertussis Toxin S1 Mutant in E.coli and Purification of Expressed Product
摘要目的 克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性.方法 采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段.将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达.表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 PCR及重叠延伸获得了约700 bp的目的 基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27 000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应.结论 成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础.
更多相关知识
- 浏览262
- 被引1
- 下载8
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
