换一批大肠癌相关基因PGDH原核表达质粒的构建及表达
Construction and Peokaryotic Expression of Recombinant Plasmid Containing Colorectal Cancer-associated 15-Hydroxyproglandin Dehydrogenase Gene
摘要目的 构建15-羟基前列腺素脱氢酶(PGDH)原核表达质粒,并在大肠杆菌中诱导表达PGDH蛋白.方法 以人正常大肠黏膜组织总RNA为模板,利用RT-PCR扩增PGDH基因的编码序列,克隆入原核表达载体pBV220,转化E.coli DH5a,经温控诱导表达,并经Ni2+ -NTA亲和层析纯化,目的 蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果 重组质粒pBV220-PGDH-Hia6经PCR及酶切鉴定,证明质粒构建正确.经温控诱导后,可表达出相对分子质量约为29 000的PGDH-His6蛋白,表达产物以包涵体形式存在,3 h诱导表达量最高,约占菌体总蛋白的30%.Western blot验证了表达蛋白的特异性.纯化后目的 蛋白纯度大于95%.结论 已成功构建PGDH原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了PGDH蛋白.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-5503.2008.04.006
发布时间
2008-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
山西省科技攻关计划（2006031087-02）
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