换一批
换一批摘要目的 构建高效表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的CHO 工程细胞株.方法 从pCIneo质粒出发,构建含有改造了稀有密码子的HBsAg S基因和启动子弱化的二氢叶酸还原酶(DHFR)转录单位的新型表达载体,利用脂质体转染CHO/dhfr-细胞.经3轮氨甲喋呤(MTX)梯度加压筛选和单克隆筛选,获得高效表达HBsAg的CHO 工程细胞株,并对HBsAg的分泌动态进行检测.结果 所构建的新型表达载体pC1-DS经PCR及酶切鉴定,证明构建正确,转染CHO/dhfr~-细胞后,经筛选得到高效表达HBsAg的CHO T程细胞株3F9,表达量达9.21μg/10~6个细胞·48 h.单层细胞培养动态表明,3F9株细胞能在40 d内稳定高效表达HBsAg.结论 已成功构建稳定高效表达HBsAg的CHO工程细胞株,为提高HBsAg的产量创造了条件.
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