换一批
换一批重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中的表达及其细胞毒性
Expression of Recombinant Target Toxin hIL6(T22)-PE38 in E.coli and Cytotoxicity of Expressed Product
摘要目的 在大肠杆菌中表达、纯化重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38,并检测其细胞毒性.方法 以 PHis-hIL6(T22)-PE38质粒为模板,PCR扩增hIL6(T22)-PE38基因,插入表达载体pET-28a(+)的Neo Ⅰ和Xho Ⅰ多克隆位点,构建重组表达质粒,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)、Rosetmblue(DE3)和BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并对表达条件进行优化.表达产物经亲和层析纯化后,检测其细胞毒性.结果 重组表达质粒pET-28a-hIL6(T22)-PE38经双酶切和测序证明构建正确.表达的重组毒素相对分子质量约56 000,在大肠杆菌Rosettablue(DE3)中表达量最高.最适诱导表达条件为:1 mmol/L IPTG 28℃诱导4 h.重组毒素能选择性地杀伤人骨髓瘤细胞U266和鼠骨髓瘤细胞SP2/0,体外对U266和SP2/0细胞的IC50分别为0.5～1.O和1.0～1.5.g/mi.结论 重组靶向毒素hIL6(T22)-PE38在大肠杆菌中成功获得可溶性表达,纯化的蛋白可明显选择性杀伤U266和SP2/0细胞.
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