换一批
换一批AP2α重组腺病毒质粒的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达
Construction of recombinant adenovirus vector containing transcriptional factor activator protein 2a and its expression in rat mesenchymal stem cells
摘要目的 构建转录因子AP2α( Activator protein 2α)重组腺病毒质粒,感染大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells.MSCs),并检测其表达.方法 从大鼠PC12细胞总RNA中PCR扩增AP2α基因,定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtraceTOX,构建重组质粒,与腺病毒骨架质粒pAd-Easy1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd-AP2α,转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad-AP2α,感染大鼠骨髓MSCs,荧光显微镜下观察RFP的表达；Real-time PCR及Western blot检测AP2α的表达.结果 pAdtrace-AP2α质粒经PCR及双酶切鉴定,均可见约1 400bp的目的基因条带,测序结果与GenBank报道一致,并正确克隆至腺病毒质粒中；重组腺病毒pAd-AP2α在HEK293细胞中包装,病毒滴度可达2.6×108 pfu/ml;感染MSCs 48 h可观察到60％以上的RFP阳性细胞,经Real-time PCR及Western blot鉴定,感染后72 h,MSCs中AP2α的表达显著增高(P＜0.01).结论 成功构建了携带转录因子AP2α的重组腺病毒质粒,其能有效感染MSCs.增强MSCs中AP2α的表达.
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栏目名称
基础研究
发布时间
2012-04-20
基金项目
国家自然科学基金
重庆市自然科学基金
中国博士后基金
重庆市卫生局医学科研项目
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