金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体的原核表达和免疫学活性

Prokaryotic expression and immunological activity of Staphylococcus aureus α-hemolysin and its mutant

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摘要目的原核表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)α-溶血素(α-hemolysin,Hla)及其突变体,并检测其免疫学活性.方法采用PCR法从S.aureus中扩增hla基因,将该基因克隆至原核表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pET28a-hla,并利用点突变试剂盒进行突变,获得重组质粒pET28a-hlaH35L.将两种重组表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;表达的重组蛋白经Ni-NTA亲和层析和CM离子交换层析纯化后,检测其溶血活性、免疫血清的抑制溶血活性及HlaH35L蛋白的免疫保护作用.结果重组表达质粒pET28a-hla经双酶切和测序证明构建正确;重组质粒pET28a-hlaH35L的测序结果显示,第35位氨基酸突变位点与设计相符.表达的Hla和HlaH35L蛋白相对分子质量约为36 000,均为可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的50％,纯化后纯度均在90％以上.Hla具有溶血活性,溶血比活为152 HU/mg; HlaH35L无溶血活性;抗Hla和抗HlaH35L血清均具有抑制Hla溶血的活性;在小鼠滴鼻攻击模型中,HlaH35L具有一定的保护作用.结论成功在大肠埃希菌中表达了具有良好免疫学活性的Hla及其突变体HlaH35L,为筛选S.aureus候选疫苗组分奠定了实验基础.