换一批乙型脑炎病毒在Vero细胞上的传代适应性及毒种库的建立
Adaptation of Japanese encephalitis virus in Vero cells and establishment of virus seed bank
摘要目的 分析乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)在Vero细胞上的传代适应性,进行培养条件及接种方式的优化,并建立毒种库.方法 将JEV P3株在Vero细胞上连续适应性传至20代(P3V1 ～ P3V20),采用小鼠法检测P3V2、P3V3、P3V4的病毒滴度.优化JEV静置培养条件(维持液pH值、培养温度、MOI)及接种方式(单层接种法、混合接种法),并进行培养规模的放大.采用RT-PCR法扩增P3V0、P3V 1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代病毒的E基因片段,并进行测序分析.建立JEV毒种库,并进行全面检定.结果 JEV在Vero细胞上传代适应性良好,各代次病毒滴度均大于8.5 lgLD5o/ml.最适培养条件为:病毒维持液pH值为7.6,培养温度为34℃,病毒MOI为0.1;最佳接种方式为:单层接种法.在不同培养规模时,病毒滴度变化较小,且均维持在较高水平.P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20各代次间E基因片段同源性为100％,传代稳定性良好.建立的毒种库的鉴别试验、无菌检查、支原体检查、病毒滴定、病毒外源因子检查及免疫原性检查结果均符合《中国药典》三部(2010版)相关要求.结论 已完成JEV在Vero细胞上的适应性传代培养,并成功建立毒种库,为实现以Vero细胞为基质的JEV疫苗的研发奠定了基础.
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关键词
乙型脑炎病毒Vero细胞传代适应性毒种库Japanese encephalitis virus (JEV) Vero cells Subculture Adaptability Virus seed bank
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2015-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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