换一批重组人成纤维细胞生长因子21慢病毒质粒的构建及鉴定
Construction and identification of recombinant lentiviral plasmid with human fibroblast growth factor21
摘要目的 构建人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,hFGF21)重组慢病毒质粒,并进行包装和鉴定.方法 PCR扩增人FGF21 ORF序列,经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后,连接至慢病毒载体PLV-EF1 a-EGFP[2A] Puro,构建重组慢病毒质粒PLV-EF1 a-EGFP[2A]Puro-hFGF21,经293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,并感染KMB17靶细胞.荧光显微镜观察293T细胞中报告基因EGFP的绿色荧光,判断重组慢病毒的感染效率;RT-PCR法检测KMB17靶细胞中hFGF21基因mRNA的转录;免疫荧光和Western blot法检测KMB17靶细胞中hFGF21蛋白的表达.结果 重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-hFGF21经双酶切及测序鉴定,证明构建正确,在包装细胞中获得较高的转染效率,重组慢病毒感染KMB17靶细胞72 h后,荧光显微镜下可见EGFP绿色荧光.感染组KMB17靶细胞中存在hFGF21基因mRNA的转录和蛋白的表达.结论 成功构建了重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-hFGF21,并于KMB17靶细胞中表达,为FGF21功能与特性的相关研究及基因工程药物的探索和研发奠定了基础.
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发布时间
2015-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
协和青年基金资助和中央高校基本科研业务费专项资金资助项目（(33320140083)）
云南省应用基础研究计划面上项目（(2013FB089)）
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