摘要目的 建立高效液相色谱串联三重四级杆质谱法检测重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,rEPA)蛋白原液中氨苄西林残余量.方法 用乙腈沉淀蛋白质,离心后收集上清,采用高效液相色谱串联三重四级杆质谱法上样分析,色谱条件:色谱柱Zorbax SB-C18 Rapid Resolution HT,1.8 Micron 2.1 mm× 100mm,流动相30％乙腈,流速0.1 ml/min;质谱检测条件:多重反应监测(multiple reaction monitoring, MRM),正离子模式,ESI电压3500V,碎裂电压110 V,碰撞能10,气体流速8 L/min,母离子的质荷比(mass to charge ratio,m/z)=350.1,定量子离子m/z=105.8,定性子离子m/z=159.9.对建立的方法进行系统适用性、专属性、精密度、稳定性验证,确定该方法的线性范围及最低检出限、定量限,并进行基质效应试验.结果 该方法试验参数符合检测要求,对氨苄西林的检测专属性强,当氨苄西林浓度在10～100 ng/ml范围内,r2＞0.999 00,最低检出限为5 ng/ml,最低定量限为10 ng/ml.氨苄西林加标试验的回收率在98％～110％之间,重复性及日间精密度RSD均小于5.5％;冻融稳定性、样品前处理后的稳定性、短期稳定性试验中,样品回收率均在95％～ 120％之间;以超纯水5倍稀释的rEPA蛋白原液作为溶剂配制的3个不同浓度的氨苄西林对照品溶液的回收率均接近120％,RSD值在3％～5％之间,准确度和精密度良好.结论 该方法系统适用性好,灵敏度高,专属性强,准确度和精密度好,检测时间短,是一种易于实现仪器自动化分析的方法.