换一批N-末端核定位序列对猪圆环病毒衣壳蛋白病毒样颗粒在汉逊酵母中组装的影响
Effect of nucleus located site at N-terminus on assembly of virus-like particles of porcine circovirus capsid protein in Hansenula polymorph
摘要目的 探讨N-末端核定位序列(nuclear localization signal,NLS)对猪圆环病毒2型(porcine circovims type 2,PCV2)衣壳蛋白病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)在汉逊酵母(Hansenula polymorpha,HP)中组装的影响.方法 分别构建表达PCV2ORF2全长及NLS截短型重组表达质粒pMOXZ-full和pMOXZ-△N40,电转至HP,构建重组酵母表达菌株full-HP和△N40-HP,获得的两种表达产物经蔗糖密度梯度超速离心及超滤后,Western blot法检测两种表达产物的单体蛋白表达和VLP组装效率,透射电子显微镜观察VLP形态,小鼠免疫试验检测VLP的免疫原性,地高辛标记DNA杂交法检测VLP的DNA结合能力.结果 与全长ORF2表达产物PCV2-VLP(full)比较,NLS截短型表达产物PCV2-VLP(△N40)的单体表达量略有提高,但VLP组装效率及DNA结合能力均降低.两种VLP颗粒形态相近,直径约20 nm;两种VLP免疫小鼠血清的抗体几何平均滴度(GMT)差异无统计学意义(P＞0.05).结论 去除NLS可提高PCV2衣壳蛋白VLP单体的表达水平,但不是VLP组装所必须的,且可使VLP的组装率略有降低.本研究为PCV2-VLP结构和疫苗的研究奠定了基础.
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