换一批小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2基因真核重组表达质粒的构建及其对微管蛋白聚合的影响
Construction of eukaryotic expression vector for mouse serine/ arginine-rich protein specific kinase 2 gene and its effect on microtubule polymerization
摘要目的 构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因(srpk2)的真核重组表达质粒,并分析其对微管蛋白α-Tubulin聚合的影响.方法 利用RT-PCR法扩增srpk2的全长cDNA序列,通过分子克隆技术构建真核重组表达质粒pLV-EGFP(2A)Puro-srpk2;在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将真核重组表达质粒及空载体pLV-EGFP2(A)Puro分别转染人胚肾HEK293T细胞,同时设空白对照组(未转染).采用RT-PCR及Westem blot法分别检测HEK293T细胞中srpk2基因mRNA转录及SRPK2蛋白的表达隋况;Western blot法分析HEK293T细胞中聚合态和游离态α-Tubulin的含量.结果 双酶切及DNA序列鉴定证明真核重组表达质粒pLV-EGFP2(A)Puro-srpk2构建正确,且在HEK293T细胞中实现了srpk2基因过表达.真核重组表达质粒转染组HEK293T细胞中游离态α-Tubulin含量显著低于空载体转染组及空白对照组(P＜0.05),而聚合态α-Tubulin水平明显高于空载体转染组及空白对照组(P＜0.05).结论 成功构建了srpk2基因的真核重组表达质粒,SRPK2可促进α-Tubulin微管蛋白聚合.
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关键词
丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2真核细胞基因表达人胚肾HEK293T细胞微管蛋白Serine/arginine-rich protein specific kinase 2Eukaryotic cellsGene expressionHEK293 cellsTubulin
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发布时间
2017-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
山西省回国留学人员科研项目（2011-043）
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