换一批
换一批摘要目的 构建RECK(reversion-inducing cysteine-rich protein with kazal motifs)基因mRNA 3'非编码区(3'-untranslated region,3'UTR)全长及两个截短片段的荧光素酶报告基因载体,以进一步研究microRNA对RECK基因的调控.方法 以人乳腺癌细胞系MCF-7基因组DNA为模板,PCR扩增RECK基因mRNA的3'UTR全长及两个截短片段,利用双酶切将目的片段定向插入报告基因载体pGL3-Control中,将克隆载体转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞进行扩增,采用菌落PCR、双酶切、测序鉴定重组子,双荧光报告基因检测其表达活性.结果 重组载体中RECK3'UTR序列与GenBank序列比对一致且插入方向正确;3个重组载体分别命名为pGL3-RECK 3'UTR-1、pGL3-RECK3'UTR-2和pGL3-RECK 3'UTR-3,转染细胞后可表达荧光素酶基因.结论 成功构建了RECK基因3'UTR全长及两个截短片段的荧光素酶报告基因载体,为进一步研究microRNA对靶基因RECK的调控奠定了基础.
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栏目名称
基础研究
发布时间
2018-05-18
基金项目
国家自然科学基金项目“基于转录组学研究肿瘤转移中骨桥蛋白对肿瘤细胞释放外泌体的调控”
内蒙古医科大学科技百万工程项目“靶向RECK基因的micro-RNA对乳腺癌转移调控机制研究”
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