呈递预测的小鼠OX40胞外域抗原表位重组病毒样颗粒的制备

Preparation of recombinant virus-like particles presenting predicted antigenic epitopes of mouse OX40 extracellular domain

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摘要目的制备呈递预测的小鼠OX40胞外域抗原表位重组病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),为进一步以主动免疫方式靶向OX40调控T细胞免疫功能奠定基础.方法通过抗原数据库中氨基酸的出现频率,对肽段氨基酸组成进行分析,获得其作为抗原表位的潜能,从而预测潜在的OX40线性B细胞表位;经基因重组技术将抗原表位插入至乙型肝炎核心抗原(hepatitis B core antigen,HBcAg)的优势表位区域,在大肠埃希菌中表达,超声裂解菌体,上清中目的蛋白经硫酸铵沉淀及Sepharose 4 Fast Flow凝胶层析纯化,沉淀中目的蛋白经2％ TritonX-100洗涤、尿素溶解及脱盐纯化,获得的蛋白经电镜观察VLPs形态.将VLPs经皮下免疫小鼠,ELISA法检测血清特异抗体水平.结果经分析预测获得7个潜在的抗原表位;嵌合表位的重组HBcAg蛋白(P1 ～ P7)在大肠埃希菌中均获得了有效表达,其中P3、P6和P7蛋白存在于超声裂解菌体的可溶性上清中,而P1、P2、P4和P5蛋白存在于沉淀中.纯化的目的蛋白均以VLPs形式存在,免疫小鼠可有效激发OX40特异的抗体应答.结论成功构建并纯化制备了呈递OX40抗原表位的重组VLPs.