换一批表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白受体结合域和N蛋白的重组腺病毒的构建及鉴定
Construction and identification of recombinant adenovirus expressing S protein receptor binding domain and N protein of SARS-CoV-2 Delta variant
摘要目的 构建表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)Delta突变株S蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)和N蛋白的重组腺病毒,并进行鉴定.方法 将SARS-CoV-2 RBD和N基因片段分别克隆至pcDNA3.0BA载体上,构建重组质粒pcDNA3.0BA-RBD-N,PCR扩增RBD-CMV-N片段,连接至穿梭载体pShuttle-CMV上,将穿梭质粒pShuttle-RBD-N与pAdeasy-1进行同源重组,获得重组质粒pAdeasy-1-RBD-N,转染HEK293细胞进行重组腺病毒Ad-RBD-N包装,RT-PCR法检测重组腺病毒中RBD和N基因在HEK293细胞中的转录,Western blot和免疫荧光法检测重组腺病毒中RBD和N蛋白的表达.将Ad-RBD-N通过肌肉注射免疫12只雌性BALB/c小鼠,免疫剂量为5 × 109copies/只,免疫后14 d经尾静脉采血,ELISA法检测血清抗体效价.结果 重组腺病毒RBD和N基因能在HEK293细胞中正常转录,RBD和N蛋白能在MA104细胞中正常表达.免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对RBD和N蛋白的特异性IgG抗体.结论 成功构建了表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白RBD和N蛋白的重组腺病毒,为Delta突变株疫苗的后续研究奠定了基础.
更多相关知识
关键词
严重急性呼吸综合征冠状病毒2S蛋白受体结合域N蛋白腺病毒Severe acute respiratory symptom coronavirus 2(SARS-CoV-2)S proteinReceptor binding domain(RBD)N proteinAdenovirus
栏目名称
发布时间
2023-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
- 浏览20
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
