一种改良原代海马神经元糖氧剥夺/复氧模型的建立

Establishment of an improved model of oxygen glucose deprivation/reoxygenation of primary hippocampal neurons

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摘要目的建立一种改良的原代海马神经元糖氧剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型.方法从SD乳鼠脑组织中分离海马组织,制备海马神经元悬液,通过抑制胶质细胞数量,将海马神经元悬液分为无抑制、部分抑制和完全抑制组,经镜下观察细胞形态,确定原代海马神经元的最佳培养条件.在此基础上,将海马神经元进行糖氧剥夺0.5、1和1.5 h,再分别复氧0、24、36和48 h,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehy-drogenase,LDH)含量,CCK-8法测定神经元存活率,以LDH含量较高,对神经元存活率影响较小的条件为原代海马神经元OGD/R模型的最佳建模条件.结果部分抑制胶质细胞时,神经元纯度较高,生长状态均一良好,胶质细胞与海马神经元数量比约1∶1,可保留胶质细胞与神经元间的结构和功能联系.与OGD 1 h组比较,OGD 1 h/R36h时,LDH含量显著升高(t=4.31,P＜0.05),神经元存活率差异无统计学意义(t=1.99,P＞0.05).结论获得了胶质细胞与神经元数量约为1∶1的原代海马神经元,且生长状态良好.OGD1h/R36h条件下建立的OGD/R模型,神经元树突缩短,活力受损,存活率较高.本研究为后续相关疾病的发病机制深入研究奠定了基础.