换一批重组腺相关病毒中游离与错误包装宿主细胞DNA检测的两种前处理方法的比较
Comparison of two pretreatment methods for detection of free and mispackaged host cell DNA in recombinant adeno-associated virus
摘要目的 采用DNA酶(deoxyribonuclease,DNase)处理与填料亲和两种前处理方法检测重组腺相关病毒(recombi-nant adeno-associated virus,rAAV)游离与错误包装宿主细胞DNA(host cell DNA,HCDNA)残留量,并进行比较.方法 分别采用DNase处理法和填料亲和法分离游离与错误包装HCDNA,再进行核酸提取及qPCR检测.比较两种前处理方法检测HCDNA残留量的准确度和重复性.结果 采用DNase处理的方式,DNase未处理组核酸定量检测结果为HCDNA总残留量,DNase处理组为错误包装HCDNA量,二者差值为游离HCDNA残留量.DNase未处理和处理组回收率均为75％以上,重复性RSD小于30％.采用亲和提取方式,填料偶联亲和配基,结合rAAV,检测错误包装HCDNA回收率为75％以上,检测游离HCDNA回收率仅为36％.结论 DNase处理法可有效检出游离与错误包装HCDNA,可为后续研究奠定基础.
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关键词
腺相关病毒DNA酶亲和填料PCR宿主细胞DNA游离错误包装Adeno-associated virus(AAV)Deoxyribonuclease(DNase)Affinity ligandPCRHost cell DNA(HCDNA)FreeMispackaged
分类号
R917（药物分析）
栏目名称
发布时间
2024-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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