换一批生物反应器微载体Vero细胞罐外消化放大培养对狂犬病病毒CTN-1V株产毒能力的影响
Effect of bioreactor scale-up culture of micro-carrier Vero cells after extra-tank trypsinization on virus-producing ability of rabies virus CTN-1V strain
摘要目的 探讨微载体Vero细胞从30 L生物反应器经罐外细胞消化放大培养至300 L生物反应器对狂犬病病毒(rabies virus,RABV)CTN-1 V株产毒能力的影响.方法 将第140代Vero细胞于37 ℃培养72～120h后,按1∶4的细胞密度比传代扩增至10层细胞工厂,继续培养72～120 h;将单层致密细胞消化后接种至30 L生物反应器,微载体7～10g/L,培养温度 37 ℃,pH(7.0～7.4),溶氧 30％～80％,搅拌速度 10～50 r/min,连续灌流培养 72～120h,共培养3批;微载体Vero细胞经罐外细胞消化后放大培养至300 L生物反应器,微载体5～8g/L,培养温度37 ℃,pH(7.0～7.4),溶氧 30％～80％,搅拌速度 30～80 r/min,灌流培养72～120 h;按 MOI=0.05接种 RABV CTN-1 Ⅴ株,每24 h收获病毒液1次,检测病毒滴度和抗原含量.结果 30 L生物反应器微载体Vero细胞培养96 h后密度约为1 × 107个/mL;300 L生物反应器微载体Vero细胞培养96 h后密度约为7.4 × 106个/mL.病毒接种96 h达峰值,病毒平均滴度为6.8 lgLD50/mL,抗原平均含量为2.58 IU/mL.结论 微载体Vero细胞从30 L生物反应器经罐外细胞消化放大培养至300 L生物反应器的工艺稳定可行,对RABV CTN-1V株的产毒能力影响较小,可为RABV灭活疫苗大规模生产提供参考资料.
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关键词
狂犬病病毒Vero细胞生物反应器微载体罐外消化放大培养Rabies virus(RABV)Vero cellsBioreactorMicro-carrierExtra-tank trypsinizationScale-up culture
分类号
R392-33（医学免疫学）
栏目名称
发布时间
2024-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2021YFC2600200）
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