换一批青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白表达及纯化条件的优化
Optimization of expression and purification conditions of recombinant Hq001 protein in salivary glands of Haemaphysalis qinghaiensis
摘要目的 对青海血蜱唾液腺重组Hq001蛋白的表达条件(表达菌株及诱导条件)及纯化方式(非变性及变性纯化)进行优化.方法 将重组质粒pET-30a-Hq001分别转化至不同感受态菌株[E.coil BL21(DE3)、E.coil Rosetta(DE3)、E.coil ArcticExpress(DE3)pRARE2],确定最适表达菌株后,对 IPTG 终浓度(0、0.5、1.0 mmol/L)、诱导温度(20、25 ℃)及诱导时间(0、2、4、6、8 h)进行优化.最佳诱导条件表达的菌体经高压均质破碎后,采用非变性(变性-复性-过柱)及变性(变性-过柱-复性)两种方式进行Ni-NTA亲和层析纯化.表达及纯化产物均经12％SDS-PAGE分析.结果 重组Hq001蛋白最适表达菌株为感受态E.coil BL21(DE3);最适诱导条件为:IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导温度25 ℃,诱导时间4 h.非变性纯化方式可获得相对分子质量约为18 800的目的蛋白,大小与预期相符.结论 采用优化的表达条件及纯化方式可获得青海血蜱唾液腺重组rHq001蛋白.
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关键词
青海血蜱包涵体变性复性纯化Ni-NTA亲和层析Haemaphysalis qinghaiensisInclusion bodiesDenaturationRenaturationPurificationNi-NTA affinity chromatography
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2024-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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