换一批群体倍增水平评价悬浮培养HEK293细胞的传代稳定性
Application of population doubling level in evaluation of passage stability of HEK293 cells in suspension culture
摘要目的 采用群体倍增水平(population doubling level,PDL)评价悬浮培养HEK293细胞的传代稳定性,并进行验证,以期为该细胞工业化生产培养提供实验依据.方法 将工作种子批HEK293细胞连续传代60d,每2d传1代,评价PDL增加至10～60时的细胞稳定性.通过相关研究结果计算获得当HEK293细胞传代培养至2 500L规模时,各代PDL应控制在2±0.2范围内.将工作种子批HEK293细胞经摇瓶(125、500、1 000、3 000 mL,共传4代)、细胞扩增系统(cell expansion system,CES)(25、25及50 L,共传3代)、生物反应器(100、500、500,共传3代)阶段培养,各代PDL均控制在2±0.2范围内,共培养3批,并分析细胞密度、活率、结团率、直径等指标.500 L生物反应器培养HEK293细胞72h,按MOI=5～10接种工作种子批腺病毒,培养2 d,收获病毒培养液,检测病毒颗粒数.结果 工作种子批HEK293细胞连续传代至PDL达60时仍能维持较高的细胞密度和活率.将PDL控制在2±0.2范围内,3批HEK293细胞在摇瓶、CES、生物反应器培养阶段的密度均＞2.0 × 106个/mL,活率均＞96％,细胞直径约为17μm;结团率均＜35％.3批500 L生物反应器培养的HEK293细胞接毒2 d后,病毒颗粒数分别达11.68× 1010、12.55 × 1010和9.38 × 1010vp/mL.结论 采用PDL评价HEK293细胞传代稳定性是可行的,可更科学地反映传代细胞的生长状态.
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关键词
群体倍增水平HEK293细胞悬浮培养传代稳定性Population doubling level(PDL)HEK293 cellsSuspension culturePassageStability
分类号
R183.3（流行病学与防疫）
栏目名称
发布时间
2024-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
河南省重大科技专项（201100311800）
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