摘要目的 研制鼠疫耶尔森菌(以下简称鼠疫菌)核酸检测试剂国家参考品,以期用于鼠疫菌核酸检测试剂的评价和质量控制.方法 选择5株鼠疫菌[EV株、0614F株、otten株、Tjiusidej(R)株、田鼠型201株]和10株阴性菌(3株小肠结肠炎耶尔森菌、牛种布鲁菌104M株、炭疽芽孢杆菌、伤寒沙门菌、土拉热弗朗西丝菌LVS株、假结核耶尔森菌、霍乱弧菌和志贺菌),经培养、收获、灭活,获得参考品原液,进行普通PCR扩增法验证后,制备成1套由5支阳性参考品、10支阴性参考品、1支最低检出限参考品(EV株阳性参考品经冻干制备而成)和1支重复性参考品(制备方法同最低检出限参考品)组成的国家参考品.采用荧光定量PCR法检测国家参考品的阴阳性符合率、均匀性和稳定性,并组织4家单位进行协作验证.结果 阳性参考品原液经普通PCR扩增,均可见相应目的基因条带;阴性参考品原液未扩增出相应基因条带.荧光定量PCR法检测国家参考品阴阳性符合率均为100％.重复3次检测10支最低检出限参考品的3a基因Ct值差异无统计学意义(F=1.567,P=0.193).与未经冻融的参考品比较,反复冻融3次的最低检出限参考品及阳性参考品3a基因Ct值差异无统计学意义(t分别为0.416和0.079,P均＞0.05).与未经高温保存的参考品比较,37 ℃放置5 d的最低检出限参考品Ct值差异有统计学意义(t=7.109,P=0.002),4和25 ℃条件下差异无统计学意义(t分别为0.341和0.751,P均＞0.05);4、25、37 ℃放置5 d的阳性参考品Ct值差异均无统计学意义(t分别为2.442、0.373和-0.043,P均＞0.05).4家单位检测阳性和阴性参考品的符合率均为100％;2家单位检测最低检出限参考品的最低检出限为1 × 102个/mL,另2家为1 × 103个/mL;4家单位对重复性参考品检测结果的CV值＜10.0％.结论 本研究研制的鼠疫菌核酸检测试剂国家参考品具有良好的均匀性和冻融稳定性,于4和25 ℃下放置具有良好的加速稳定性,可用于鼠疫菌核酸检测试剂的评价和质量控制.