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基于实验设计的SARS-CoV-2中和抗体相对活性检测方法的建立及验证

Development and validation of relative activity evaluation method for SARS-CoV-2 neutralizing antibody based on Design of Experiment

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摘要目的建立基于实验设计(Design of Experiment,DOE)的SARS-CoV-2中和抗体相对活性检测方法,并进行验证,以期为SARS-CoV-2中和抗体的研发和质量评价提供可靠的检测方法.方法采用SARS-CoV-2变异株假病毒建立用于评价SARS-CoV-2中和抗体相对活性的方法,通过DOE优化细胞密度[(3～5)× 105个/mL]、假病毒滴度(3 750～6 250 TCID50/mL)、抗体与假病毒中和时间(0.5～1.5h)、抗体假病毒复合物与细胞作用时间(48～96h),并验证方法的专属性、线性范围、准确性、精密性.采用优化的方法检测2批SARS-CoV-2中和抗体的相对活性.结果确定最佳细胞密度为4 × 105个/mL,假病毒滴度为6 250 TCID50/mL,抗体与假病毒中和时间为1.5 h,抗体假病毒复合物与细胞作用时间为96 h.仅SARS-CoV-2中和抗体呈典型量效曲线,抗VEGF单克隆抗体和样品稀释液均未呈现量效曲线;SARS-CoV-2中和抗体理论效价在50％～200％范围内与检测值呈良好的线性关系,线性方程为y=1.0342x-0.013,r=0.958 8;50％、71％、100％、141％和200％相对效价水平样品3次检测结果均值的相对偏倚为-6.2％～7.3％,几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)为 3.2％～16.9％.2 批 SARS-CoV-2 中和抗体相对活性分别为91％和118％.结论建立的方法具有良好的专属性、准确性及精密性,可用于SARS-CoV-2中和抗体相对活性的检测.