摘要目的 建立基于多重国产流式荧光平台的九价人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)疫苗人血清IgG抗体检测方法,并对方法进行优化及验证,以替代Luminex技术,降低检测成本.方法 将筛选到的9种国产磁性荧光微球与9种Luminex荧光微球分别偶联HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58这9种抗原,偶联抗原的微球在同一孔中与血清或单抗孵育,通过生物素标记抗体和链霉素标记藻红蛋白双重识别,经国产多重荧光生物分析系统检测得到荧光中位数值(median fluorescent intensity,MFI).比较国产微球及Luminex微球与国产流式荧光平台的适配性、检测区间及性能、热稳定性等指标,采用交叉法及实验设计(Design of Experiment,DoE)优化检测条件,并对该方法进行验证.结果 筛选的国产荧光微球和Luminex微球均能被国产多重荧光生物分析系统正确识别,且每种微球均能特异性聚集.9种HPV型别特异性单抗校准曲线拟合度R2均＞0.99,在微球的热加速稳定性试验中,国产微球相较于Luminex微球更稳定,且检测偏差更小.该方法检测特异性良好,单重微球分别检测及多重微球同时检测9型标准品及临床血清样本的浓度偏差均在±20％以内.方法的定量区间倍差均超过4000倍,HPV6/16/18/31/58型为0.015 3～62.5 ng/mL,HPV11 为 0.061 0～250 ng/mL,HPV33/52 为 0.030 5～125 ng/mL,HPV45 为 0.007 6～31.25 ng/mL,且标准曲线和临床血清样本的平行性良好,可满足临床血清样本定量检测的要求;检测方法的准确度回收率偏差＜15％,精密度偏差＜10％,方法总误差＜25％,样本的稀释线性、选择性(高脂血清样本干扰性)、血清样本冻融稳定性均符合《中国药典》四部(2020版)要求.结论 基于国产流式荧光生物分析系统及荧光微球,成功建立了 HPV临床血清IgG抗体定量检测方法,打破了 Luminex平台的技术壁垒,检测成本更低,可及性更好,可用于多价型疫苗的免疫原性评价.