换一批基于刺突糖蛋白受体结合区的重组SARS-CoV-2疫苗抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证
Development and verification of double antibody sandwich ELISA method for determination of antigen content of recombinant SARS-CoV-2 vaccine based on spike glycoprotein receptor-binding domain
摘要目的 建立基于刺突糖蛋白(S蛋白)受体结合区(receptor-binding domain,RBD)的重组SARS-CoV-2疫苗抗原含量的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行方法验证.方法 以GH4人源单克隆抗体为包被抗体,HRP标记的CB6人源单克隆抗体(CB6-HRP)为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,确定GH4(500、1 000、2 000 ng/mL)及CB6-HRP(3.906 25～500 ng/mL)的工作浓度,并对方法进行线性范围、准确性、精密性、专属性和耐用性验证.采用建立的方法检测3批重组SARS-CoV-2疫苗(CHO细胞)原液的抗原含量.结果 GH4及CB6-HRP的工作浓度分别为1 000和31.25 ng/mL.原液参比品在0.488～125 ng/mL范围内与A450呈良好的线性关系,R2均＞0.99;准确性验证的回收率在87.2％～120.5％之间;重复性和中间精密性验证的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均＜20.0％;专属性验证的错误率在-16.6％～2.1％之间;耐用性验证的RSD均＜20.0％.3批疫苗原液抗原含量分别为638.9、592.4、664.8 ng/mL,RSD为5.8％.结论 建立的基于S蛋白RBD的双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的准确性、精密性、专属性和耐用性,可用于重组SARS-CoV-2疫苗抗原含量的检测,为该疫苗的质量控制奠定了基础.
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关键词
重组SARS-CoV-2疫苗刺突糖蛋白受体结合区双抗体夹心ELISA法抗原含量Recombinant SARS-CoV-2 vaccineSpike glycoproteinReceptor-binding domain(RBD)Double antibody sandwich ELISAAntigen content
分类号
Q533（糖《醣》）
栏目名称
发布时间
2025-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家重点研发计划（2020YFC0842300）
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