摘要目的 利用磁珠分离法结合荧光染色法,建立口服六价重配轮状病毒(rotavirus,RV)减毒活疫苗(Vero细胞)原液及成品中DNA残留量的检测方法,并进行验证.方法 采用宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒(磁珠法)提取样品中的残留Vero细胞DNA,再利用荧光染色对样品中残留DNA进行测定,采用直线回归拟合标准曲线并对样品中的DNA残留量进行分析.对建立的方法进行线性范围、精密度、准确度、专属性、耐用性、定量限验证.对6个血清型的单价原液和成品中的残留宿主细胞DNA进行测定,并采用3种不同方法(荧光染色法、qPCR法、分子杂交法)进行检测,比较检测结果的一致性.结果 该方法检测口服六价重配RV减毒活疫苗(Vero细胞)DNA残留量的定量限为1.25 ng/mL,标准品浓度在1.25～80 ng/mL范围内线性关系良好,线性相关系数(r)为1.00;单价原液重复检测6次的加标回收率在93.8％～132.1％之间,成品重复检测6次的加标回收率在66.0％～90.0％之间;同一人员对单价原液和成品重复检测6次的相对标准差(relative standard deviation,RSD)在5.5％～16.1％之间,不同人员对单价原液和成品重复检测6次的RSD分别为7.7％和15.6％;用干扰溶液与RNase-free Water分别稀释标准品至25 μg/mL,Vero细胞DNA残留量检测结果的回收率在98.0％～138.8％之间,RSD＜12％;单价原液和成品不同孵育时间检测结果的RSD分别＜16.3％和8.6％;不同时间和不同实验室对6个不同血清型的单价原液和3批成品中DNA残留量检测结果的RSD＜7.1％和6.1％;3种不同方法对同一份样品的检测结果一致性较好.结论 磁珠分离法和荧光染色法相结合可用于口服六价重配RV减毒活疫苗(Vero细胞)DNA残留的含量测定,同时也可作为工艺过程中对中间品等关键步骤的评价手段.