换一批适应悬浮MDCK细胞A型流感病毒株的筛选及拯救
Screening and rescue of influenza A virus strain adapted to suspension MDCK cells
摘要目的 筛选并拯救适应在悬浮MDCK细胞中增殖的A型流感病毒株,以期为细胞流感疫苗株的制备及筛选提供实验依据.方法 将A/Nebraska/14/2019(H1N1)及A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019_CNIC-1909(H1N1)2株流感毒株分别于悬浮MDCK细胞中进行连续适应性传代,通过检测血凝滴度及细胞培养半数感染量(CCID50)筛选稳定适应悬浮MDCK细胞培养的毒株,并以其为亲本株,采用反向遗传学技术拯救获得流感病毒骨架毒株reH1N1及重组毒株rcH1N1,电镜下观察病毒粒子形态,经空斑纯化后进行序列验证.将纯化重组毒株rcH1N1在悬浮MDCK细胞中进行连续传代培养,检测血凝滴度及CCID50,并验证其遗传稳定性.结果 毒株A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019_CNIC-1909的血凝滴度和CCID50更稳定,更适应悬浮MDCK细胞培养.拯救获得的重组毒株rcH1N1及骨架毒株reH1N1的病毒粒子形态均具有流感病毒粒子形态特征,空斑形成单位分别为8 × 107及6 × 107 PFU,各段基因的PCR产物序列与重组质粒序列一致.重组毒株rcH1N1经5次传代后可获得较高滴度且稳定的毒株,血凝滴度最高为1∶512,lgCCID5.最高为7.57,且传代毒株遗传物质保持稳定.结论 筛选及拯救获得了适应悬浮MDCK细胞的A型流感病毒株rcH1N1,为细胞流感疫苗的研发奠定了基础.
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关键词
A型流感病毒株反向遗传学悬浮培养MDCK细胞细胞流感疫苗Influenza A virus strainReverse geneticsSuspension cultureMDCK cellsCell-based influenza vaccine
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发布时间
2025-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
吉林省科技发展计划项目（20210204082YY）
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